Elisa試劑盒的配制方法及選購(gòu)提醒
目前，Elisa試劑盒在實(shí)驗(yàn)室中已經(jīng)相當(dāng)?shù)钠占傲?，絕大多數(shù)的試劑盒都是用于檢測(cè)未知樣本中抗原的濃度。而市場(chǎng)中試劑盒并非隨便使用的，需要根據(jù)操作者們的自身?xiàng)l件與要求。我們?cè)谶x擇Elisa試劑盒應(yīng)該重點(diǎn)考慮實(shí)驗(yàn)類型
雖然Elisa試劑盒有多種類型，但是它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cellELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型，In-cellELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測(cè)。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Westernblot，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外，我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。
通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間，這種方法既靈敏又有效，受到了許多研究者的青睞。不過有時(shí)候雙抗夾心法并不是好的選擇，例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著，又或者抗體只有一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下，競(jìng)爭(zhēng)性ELISA就更為適用，這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無標(biāo)記的抗原進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)，以結(jié)合捕獲抗體。
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測(cè)抗體（不論多抗還是單抗）的配對(duì)很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)抗原上的同一位點(diǎn)，為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測(cè)抗體所識(shí)別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間發(fā)生了沖突，就會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問題，我們可以選擇購(gòu)買“matchedpair”的捕獲/檢測(cè)抗體對(duì)，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才的好組合。
根據(jù)試劑盒的性能選擇，首先了解Elisa試劑盒范圍
Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)中為了確定信號(hào)和背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測(cè)抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
Elisa試劑盒的配制方法：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
第二、多咨詢供應(yīng)商的技術(shù)員，具體了解產(chǎn)品后再考慮購(gòu)買
一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml?？衫脴?biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度，建議孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物ELISA試劑盒酶的活性。
第三、Elisa試劑盒選購(gòu)注意事項(xiàng)
1.選擇時(shí)間久的試劑盒供應(yīng)商，以免遇見騙子公司。
2.濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后，請(qǐng)于37℃孵育15分鐘
3.選擇并購(gòu)買后在效期內(nèi)使用，不同批號(hào)的試劑不能混用。
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